進口C18色譜柱的選用主要考慮2個問題,即柱填料和柱規格對進口C18色譜柱的影響。
1.1 C18柱的填料對進口C18色譜柱的影響
柱填料的物理性能對填料色譜行為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下:顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學、含碳量及烷基化處理。
(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實際上進口C18色譜柱上所標的粒徑是一個平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm,實際上有一個顆粒分布度。這種分布度對柱反壓及柱效有重要作用。一般來說,平均顆粒度越小,顆粒分布度越小,進口C18色譜柱效越高,反壓亦越高。目前C18柱填料粒徑在4~10μm之間。
(2)孔徑是指填料顆粒間的孔間隙。一般所說的孔徑是指填料的平均孔徑。球形填料裝柱后平均孔徑分布比較窄,柱床結構均勻,柱效高,重現性好;無定形填料平均孔徑分布較寬,柱床結構不均勻,流動相線性速度不均勻,譜帶擴寬。平均孔徑的大小對分離大分子化合物有較大的影響,在分離含有較大分子的樣品時可能會有分子排阻效應,或產生吸附效應從而影響定量的回收率及準確度。因而在用反相色譜分離諸如蛋白或多肽樣品時應考慮選用大孔徑(如30 nm)的反相柱填料。孔體積作為硅膠多孔性的參數,在分離分析較大分子化合物時可作參考,選用較大孔體積的反相柱填料。
(3)化學鍵合相填料在高效液相色譜法中占有極重要的地位。它可以鍵合極性較大的有機基團,采用極性較小的溶劑作流動相。亦可鍵合極性較小的有機基團,選用極性較大的溶劑作流動相。
進口C18色譜柱
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