雙熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方向，第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區DNA相互作用，轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合，這些特異性的序列被稱為順式因子，.淳風生物科技|||沈陽雙熒光素酶報告基因實驗，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質粒，二者同時轉染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調或下調）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒，如pGL3-basic（轉錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉錄因子表達質粒（或microRNA質粒）與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。實驗步驟：（1）用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒中。（3）篩選陽性克隆，西安淳風生物科技有限公司，淳風生物科技，測序，擴增克隆并提純質粒備用。（4）擴增轉錄因子質粒（或microRNA質粒），提純備用，同時準備相應的空載質粒對照。（5）培養293細胞（或其它目的細胞），并接種于6孔板中，生長24小時（80%匯合度）。（6）將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。（7）用適當的方法提取蛋白并用于熒光素酶檢測。（8）加入酶作用底物，于熒光計數儀上測定熒光素酶的活性。（9）計算相對熒光強度，并與空載對照比較，判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方向，第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區DNA相互作用，轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現共價結合，.淳風生物科技|||沈陽雙熒光素酶報告基因實驗，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質粒，二者同時轉染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調或下調）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒，如pGL3-basic（轉錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉錄因子表達質粒（或microRNA質粒）與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底氵物，熒光素酶與底物反應，產生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。實驗步驟：（1）用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒中。（3）篩選陽性克隆，測序，擴增克隆并提純質粒備用。（4）擴增轉錄因子質粒（或microRNA質粒），提純備用，同時準備相應的空載質粒對照。（5）培養293細胞（或其它目的細胞），并接種于6孔板中，生長24小時（80%匯合度）。（6）將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。（7）用適當的方法提取蛋白并用于熒光素酶檢測。（8）加入酶作用底物，于熒光計數儀上測定熒光素酶的活性。（9）計算相對熒光強度，并與空載對照比較，判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方亍向，第一是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區DNA相互作用，轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferaseAssay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質粒，二者同時轉染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調或下調）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒，如pGL3-basic（轉錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉錄因子表達質粒（或microRNA質粒）與報告基因質粒共轉染293細胞或目的細胞。如果此轉錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否.淳風生物科技|||沈陽雙熒光素酶報告基因實驗