雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方向，第一是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用，轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調(diào)控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質(zhì)粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質(zhì)粒，二者同時轉(zhuǎn)染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調(diào)或下調(diào)）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic（轉(zhuǎn)錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質(zhì)粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒（或microRNA質(zhì)粒）與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞或目的細胞。如果此轉(zhuǎn)錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產(chǎn)生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。實驗步驟：（1）用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒中。（3）篩選陽性克隆，測序，擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。（4）擴增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒（或microRNA質(zhì)粒），提純備用，同時準備相應的空載質(zhì)粒對照。（5）培養(yǎng)293細胞（或其它目的細胞），并接種于6孔板中，生長24小時（80%匯合度）。（6）將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細胞。（7）用適當?shù)姆椒ㄌ崛〉鞍撞⒂糜跓晒馑孛笝z測。（8）加入酶作用底物，于熒光計數(shù)儀上測定熒光素酶的活性。（9）計算相對熒光強度，并與空載對照比較，判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方向，.淳風生物科技|||西寧雙熒光素酶報告基因公司，第一是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用，轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，.淳風生物科技|||西寧雙熒光素酶報告基因公司，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調(diào)控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質(zhì)粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質(zhì)粒，二者同時轉(zhuǎn)染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調(diào)或下調(diào)）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic（轉(zhuǎn)錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質(zhì)粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒（或microRNA質(zhì)粒）與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞或目的細胞。如果此轉(zhuǎn)錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反氵應，產(chǎn)生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。實驗步驟：（1）用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒中。（3）篩選陽性克隆，測序，擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。（4）擴增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒（或microRNA質(zhì)粒），提純備用，同時準備相應的空載質(zhì)粒對照。（5）培養(yǎng)293細胞（或其它目的細胞），并接種于6孔板中，生長24小時（80%匯合度）。（6）將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細胞。（7）用適當?shù)姆椒ㄌ崛〉鞍撞⒂糜跓晒馑孛笝z測。（8）加入酶作用底物，于熒光計數(shù)儀上測定熒光素酶的活性。（9）計算相對熒光強度，并與空載對照比較，判斷影響因子是否有效的作用于靶基因。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）目前由兩個主要的應用方向，第一是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用，轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，西安淳風生物科技有限公司，淳風生物科技，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferaseAssay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段，第二是研究微小RNA(microRNA)對于靶基因的調(diào)控，通過生物信息學方法預測microRNA潛在的靶基因以及干預位點序列，并設計合適的microRNA質(zhì)粒或干預片段，同時構建靶基因的報告基因質(zhì)粒，二者同時轉(zhuǎn)染細胞，這是確定microRNA是否能影響（上調(diào)或下調(diào)）靶基因的首選研究方法。實驗原理：1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic（轉(zhuǎn)錄因子與靶基因）或pMIR-REPORTLuciferase質(zhì)粒（微小RNA與靶基因）2）將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒（或microRNA質(zhì)粒）與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞或目的細胞。如果此轉(zhuǎn)錄因子（或microRNA）能夠激活靶啟動纟子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強度成正比。3）加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產(chǎn)生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否.淳風生物科技|||西寧雙熒光素酶報告基因公司