【產品名稱】
通用名:豬細小病毒IgG抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine parvovirus (ELISA)
【包裝規格】 96T/盒
【預期用途】
本試劑盒用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體。評估豬場豬細小病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學診斷。
【原 理】
本試劑盒系由預包被豬細小病毒(PPV)抗原的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清或血漿中豬細小病毒特異性抗體。實驗時,在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經溫育后,若樣品中含有豬細小病毒的特異性抗體,則將與包被板上抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標二抗,與包被板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶結合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。
【試劑盒組成】
1. 豬細小病毒抗原預包被微孔板條 96T×1
2. 酶標記物 (紅蓋) 11ml×1
3. 樣品稀釋液 (黃蓋) 25ml×1
4. 20X濃縮洗滌液 (透明蓋) 20ml×1
5. 底物液A (白蓋) 6ml×1
6. 底物液B (黑蓋) 6ml×1
7. 終止液 (黃蓋) 6ml×1
8. 陽性對照 (紅蓋,已滅活) 0.5 ml×1
9. 陰性對照 (綠蓋,已滅活) 0.5 ml×1
10. 蓋板膜 1張
11. 自封袋 1個
12. 說明書 1份
【樣品制備】 取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品短期可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫(25℃左右),并搖動使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條,設空白、陰性及陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl;空白對照孔不加。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A450)。
【結果判定】
定義:N=陰性對照孔平均A值;P=陽性對照孔平均A值;S=樣品孔A值;S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。
1.正常情況下,N≤0.10,P≥0.50。
2.S/P≥0.18時判為陽性,S/P<0.15時判為陰性,0.15≤S/P<0.18時判為可疑。
當本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】