預期應用
去氫表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA), 化學名為3β-羥基雄甾-5烯-17酮,是人體腎上腺與性腺分泌的一種C19類固醇素,具有雄性激素作用,可提高體內的睪酮水平,近年來因發現其具有促進肝糖氧化、減少糖原異生和抑制腫瘤的作用,因此被添加到減肥類保健食品中。目前,去氫表雄酮和其他內源性類固醇激素的濫用已成為一個嚴重的問題,目前已有含DHEA的保健食品出現, 因此本試劑盒用于檢測減肥類保健食品中的去氫表雄酮。
實驗原理
本試劑盒為一種直接競爭ELISA試劑盒。在微孔條上預包被偶聯抗原;加入樣品或標準品,樣品或標準品中的去氫表雄酮與微孔條上預包被的偶聯抗原競爭結合酶標記的去氫表雄酮多克隆抗體,游離的酶標記抗體通過洗滌被出去;再加入顯色液,結合的酶標記抗體是無色的顯色液轉化為藍色,加入反應終止液后再轉化為黃鱔,在450nm處測量,樣品吸光值與樣品中的去氫表雄酮含量成負相關,通過標準曲線即可計算出樣品中去氫表雄酮含量。
試劑盒技術指標
檢測限: 0.1ppb
檢測范圍:0.1 ppb – 62.5ppb
交叉反應:
Androsterone(雄甾酮) 0.1%
Androstenedione(雄烯二酮) 0.25%
Etiocholanolone(本膽烷醇酮) 0.1%
Testosterone(睪丸酮) 0.01%
Cortisol(皮質醇) 0.01%
Progesterone(孕酮) 0.25%
Estradiol(雌二醇) 0.01%
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶標板:96T/8孔
2. 標準品溶液:0ppb,0.1ppb,0.5ppb,2.5ppb,12.5ppb,62.5ppb(1ml/瓶)
3. 酶標記物液: 7ml/瓶。
4. 底物緩沖液: 7ml/瓶。
5. 底物液: 7ml/瓶。
6. 終止液: 7ml/瓶
7. 20倍濃洗滌液: 50ml/瓶。
樣品前處理方法:
1. 膠囊類樣品:取片劑或膠囊試樣進行粉碎混勻,稱取0.1000g試劑(準確至0.001g)于離心管中,加入1ml甲醇使用超聲提取5min后以3000r/min離心3min。準確取0.1ml試樣定容至1ml,檢測時加入50微升進行檢測。
2. 茶葉樣品:用研缽研碎茶葉樣品,稱取1g研碎的樣品,加入1ml甲醇,漩渦混勻5min后,放振蕩器上震蕩15min;3000r/min離心3min,轉移出上清,取0.1ml定容至1ml。取50μL進行分析。
3.血清樣品:將血清3000r/min離心3min,取上清50μL進行分析。