一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗鏈霉素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。
二、試劑盒特性
試劑盒靈敏度: 0.5ppb
樣本檢測下限
雞肉、雞肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王漿— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反應率
鏈霉素 — — —— —— — — — — —— — — 100%
雙氫鏈霉素 ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素 —— — — — — — — — — — — — — < 1%
慶大霉素 — — —— — — — — — — — —— — < 1%
回收率
牛 奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
雞肉組織— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王漿 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、試劑盒組成
1、 微量測試孔:每條8孔,一板12條
2、 標準液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶標記物 7ml ……………… 紅色帽
4、 抗體工作液 7ml ……………… 藍色帽
5、 底物液 A液 7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 B液 7ml ……………… 黑色帽
7、 終止液 7ml ……………… 黃色帽
8、20×濃縮洗滌液 40ml ……………… 白明帽
9、10×濃縮復溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔板、酶標儀、勻質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:單道 20ul~200ul、100ul~1000ul多道 250 ul
試 劑:濃磷酸、氫氧化鈉、Na2HPO4?12H2O、NaH2PO4?2H2O、正己烷
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時,都必須注意:
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理需配制:
配液1、將濃縮復溶液用去離子水按1:9稀釋(1份濃縮復溶液+9份去離子水)。
配液2、0.05M PB溶液
13.0gNa2HPO4?12H2O+2.2gNaH2PO4?2H2O加去離子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液
1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液
稱取4g NaOH加去離子水定溶至100ml。
(a)牛奶樣本的處理方法
1、 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50 ul牛奶+1950 ul稀釋后的復溶液)
2、 取50ul用于分析。
稀釋倍數:40
(b)雞肉、雞肝樣本的處理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本與8ml 0.05MPB緩沖液混合5min,置56℃水浴環境放置30min;
2、 室溫4000r/min以上,離心10min;
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷,充分混勻,室溫4000r/min以上,離心5min
4、 去上層液體取50ul下層液,加入450ul&nbs