細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外,尚有一些特殊需要的設(shè)備。基本可分為兩大類:第一類為常用的基本設(shè)備;第二類為較高級(jí)的特殊設(shè)備。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺(tái)的廣泛使用,很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作,并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
1.無(wú)菌操作區(qū)
(1)無(wú)菌操作室:無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c) 無(wú)菌操作間—―專用于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過(guò)高(不超過(guò)2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無(wú)死角以便清潔和消毒。工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁,臺(tái)面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。無(wú)菌操作間的空氣消毒:紫外線燈—-產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置—-最好。表1潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級(jí)別表潔凈度級(jí)別 塵粒最大允許數(shù)/立方米 微生物最大允許數(shù) 浮游菌/立方米 沉降菌/皿
100級(jí) 3,500 0 5 1
10000級(jí) 350,000 2,000 100 3
100000級(jí) 3,500,000 20,000 500 10
300000級(jí) 10,350,000 60,000 - 15無(wú)臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場(chǎng)作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的,消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。(2)凈化工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種:a)側(cè)流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。凈化工作臺(tái)工作原理(大致相同)—-通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。側(cè)流式工作臺(tái)—-空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面流向?qū)?cè),也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè),形成氣流屏障保持工作區(qū)無(wú)菌。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為封閉式。外流式(水平式)工作臺(tái)—-凈化后的空氣面向操作者流動(dòng),因而外方氣流不致混入操作,但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對(duì)操作者不利。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為開(kāi)放式(已少用)。凈化工作臺(tái)應(yīng)用注意:(1)凈化工作臺(tái)應(yīng)安裝在隔離好的無(wú)菌間或清潔無(wú)塵的房間內(nèi),以免塵土過(guò)多易使過(guò)濾器阻塞,降低凈化效果,縮短其使用壽命。(2)新安裝的或長(zhǎng)期未使用的工作臺(tái),工作前必須對(duì)工作臺(tái)和周圍環(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作,然后再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進(jìn)行滅菌處理。(3)使用凈化工作臺(tái)前,應(yīng)先用75%酒精擦洗臺(tái)面,并提前以紫外線滅菌燈照射30~50min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物。關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動(dòng)風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)兩分鐘后再進(jìn)行培養(yǎng)操作。
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