細胞培養室的設置、設備和準備工作一、細胞培養實驗室的設置及設備(一)細胞培養實驗室的設置組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的主要區別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺的廣泛使用,很大程度上方便了組織細胞培養工作,并使一些常規實驗室有可能用于進行細胞培養。細胞培養實驗室應能進行六方面的工作:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
1.無菌操作區
(1)無菌操作室:無菌操作區只限于細胞培養及其他無菌操作的區域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無菌操作室應劃為三部分:
a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環境,同時可放置恒溫培養箱及某些必需的小型儀器。
c) 無菌操作間—―專用于無菌操作、細胞培養。其大小要適當,且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應靠墻壁,臺面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。無菌操作間的空氣消毒:紫外線燈—-產生臭氧,并且室內溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-最好。表1潔凈室(區)空氣潔凈度級別表潔凈度級別 塵粒最大允許數/立方米 微生物最大允許數 浮游菌/立方米 沉降菌/皿
100級 3,500 0 5 1
10000級 350,000 2,000 100 3
100000級 3,500,000 20,000 500 10
300000級 10,350,000 60,000 - 15無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場作用下,電子管的內外電極發生強烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑,能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應,從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的,消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。(2)凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。凈化工作臺工作原理(大致相同)—-通常是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。
細胞培養實驗室的設備組織細胞培養室除一般實驗室的普通常規設備外,尚有一些特殊需要的設備。基本可分為兩大類:第一類為常用的基本設備;第二類為較高級的特殊設備。