全自動定氮儀使用過程中運用到的化學公式
目前測定蛋白質含量的方法有很多種,常見的有全自動定氮儀法、紫外吸收法、雙縮脲法、考馬斯亮藍法和質譜法等。有報道紫外吸收法無法測出牛奶、酸奶的蛋白含量,測出的豆漿蛋白含量也與實際值相差較大,不具實際使用價值。雙縮脲法是傳統的分光光度法測定蛋白質的方法,準確度好,精密度好,呈色穩定性好,試劑單一,方法簡便,但靈敏度不高,約為1mg,故現在已很少使用。考馬斯亮藍染色法快速、靈敏,但只有作微量蛋白測定時的結果才準確,因此在實驗前應將樣品稀釋至蛋白
定氮儀,也就是全自動定氮儀,包括消化爐和蒸餾裝置。消化爐的功能主要是對樣品進行消化,消化主要是通過這個化學過程來完成的:2NH2 (CH2) 2COOH + 13H2SO4 =(NH4 ) 2SO4 + CO2↑ + SO2↑+ 16H2O。消化完成后就進入蒸餾環節。蒸餾是指在樣品中加入濃氫氧化鈉,然后加熱放出氨氣的過程,其反應式如下:NaOH + (NH3) 2SO4 = 2NH3↑ + Na2SO4 + H2O。蒸餾完成后就是吸收和滴定,其過程為:2NH34H2BO3 = (NH4) 2B4O7 + 5H2O(吸收)、(NH4) 2B4O7 + 5H2O + 2HCl = 2NH4Cl + 4H3BO3(滴定)。
以上四個過程,蛋白質測定儀可以在兩種模式下完成,分別為自動模式和手動模式。自動模式即一次完成加堿、加硼酸、蒸餾、氨氣吸收整個過程,不需人工操作,全由程序控制完成。而手動模式即加硼酸、加堿、氨氣吸收三個過程單獨操作,人為控制其時間。每種模式都有其優勢,不可一概而論。粗蛋白測定儀有多種型號,如KDN-04A,KDN-04C,KDN-08A,KDN-08C,不同的型號最大的區別就是消化爐的孔數,有4孔、8、12、20孔不等。蛋白質測定儀測定范圍為0.1mgN~200mgN(毫克氮)(含氮量0.02% ~ 95%);回收率為100±1%;蒸餾速度為<5分鐘/樣品;冷卻水消耗為2L/分鐘;重復率:相對標準偏差<±1%。
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