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[供應]2D Western blot實驗技術服務
- 產品產地：廣州
- 產品品牌：輝駿生物
- 包裝規格：B001
- 產品數量：999
- 計量單位：個
- 產品單價：1
- 更新日期：2025-01-23 17:31:04
- 有效期至：2035-01-21
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2D Western blot實驗技術服務
詳細信息
一、2DWesternblot概述
2D-WB是雙向電泳與傳統westernblot相結合的一項技術。一般實驗流程為抗原蛋白混合物經雙向電泳分離，然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上，再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可檢測出抗原等電點或分子量發生的微小變化，在蛋白翻譯后修飾研究領域有廣泛應用；而2D-WB結合質譜鑒定技術，還可能從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。
二、技術服務流程
二、2D Westernblot技術服務內容
1、蛋白質抽提與定量；
2、雙向電泳；
3、轉膜，封閉，孵育，顯示成像。
三、送樣須知
樣本應避免各類污染和反復凍融，妥善保存，用干冰或液氮包裝寄送；廣州本地客戶可上門收樣。
注：接收組織、細胞、蛋白質溶液等樣品；相應一抗如果公司抗體庫里沒有，也需要客戶自己提供。
四、2D Westernblot技術服務報告內容
1、蛋白質定量結果及電泳上樣量；
2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果；
3、2D Westernblot完整的實驗報告，包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。
五、2D Westernblot實驗服務案例
六、實驗服務周期及收費標準：咨詢本公司
七、質量承諾：提供清晰、客觀的2D Westernblot結果。
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附：2DWesternblot實驗步驟：
1、樣本制備，盡可能溶解全部蛋白質，破壞蛋白與蛋白間的相互作用，避免其他雜質的干擾，與IEF兼容等。
2、雙向電泳的主要步驟，第一向電泳（IEF），膠條平衡，第二向電泳SDS-APGE。
3、第二向電泳結束后，取出凝膠進行轉膜，可選濕法轉移和半干法轉移。常用NC膜和PVDF膜。
4、封閉，5%脫脂奶粉或5%BSA封閉1小時（室溫）或過夜（4度）。
5、一抗孵育，根據抗體說明書選擇孵育時間，常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜，一抗孵育后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。
6、二抗孵育：根據一抗選擇合適的二抗（抗鼠、抗人、抗兔等），室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。
7、顯影：將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上，暗室中將膠片置于膜上，蓋上壓片夾，曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影，直到出現清晰的蛋白質條帶，清水漂洗后在定影液中定影，曝光時間需綜合考慮蛋白質的上樣量，抗體稀釋濃度，抗體孵育時間等。
8、定影后，清洗膠片，晾干，標定marker，掃描圖片和2DWesternblot圖片分析。
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