TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”,兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理類似。不同的是TAP/MS引入了2個純化標簽(strep或SBP,flag),2步純化,能有效純化裂解液中的靶蛋白及其復合物,并使非特異性蛋白的數量降至較低水平。實驗組和對照組洗脫的蛋白分別做質譜,從實驗組結果中扣除對照組中的蛋白,即可鑒定出與靶蛋白互作的蛋白。
技術優勢:
1、TAP/MS鑒定到的互作蛋白是細胞內與誘餌蛋白天然互作的,符合體內真實生理情況,可信度高。
2、采用兩步純化,能有效減少非特異蛋白的結合。
服務內容:
1、構建Flag-strep(或Flag-SBP)雙標簽的靶基因表達載體;
2、包裝慢病毒感染目的細胞,做成過表達細胞株,WB檢測表達效果(基因大于2kb時,可能導致病毒滴度不足以感染細胞系,此時如需進行加藥篩選構建穩轉細胞系,則周期預計延長3-4周);
3、細胞總蛋白,經streptactin樹脂(或strep磁珠)和anti-flag抗體兩步純化,并洗脫;
4、實驗組和對照組的洗脫液分別用胰酶酶解;
5、LC-MS/MS分析,獲得蛋白質的定量、定性信息;
6、實驗組結果扣除對照組中的蛋白,即可得到與靶蛋白互作的蛋白。
服務項目客戶提供結果交付實驗周期TAP/MS1、誘餌基因的名稱、序列、物種等信息或者誘餌基因的cDNA模板等
2、待研究的細胞(保證細胞狀態良好)及其培養相關信息1、構建好的慢病毒表達載體
2、穩轉細胞系(如做了篩選)
3、實驗組和對照組蛋白的質譜鑒定結果
4、數據分析結果預計2.5-3個月