一、內(nèi)容簡(jiǎn)介

    microRNAs（miRNAs）是一類內(nèi)源性的非編碼RNA。編碼miRNA的基因組DNA首先轉(zhuǎn)錄形成長(zhǎng)的初始miRNA（pri-miRNA），后經(jīng)Drosha核糖核酸酶切割形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的、約70-90bp的RNA前體（pre-miRNA）。Pre-miRNA又被Dicer酶剪切成約20-25bp的單鏈成熟miRNA，進(jìn)而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。
    miRNA過表達(dá)載體構(gòu)建的主要原理是將pri-miRNA或pre-miRNA序列插入polII啟動(dòng)子下游。其中，pri-miRNA（含側(cè)翼序列）的方式保留了每個(gè)miRNA特有的天然雙臂結(jié)構(gòu)，效果最好。但對(duì)于pri-miRNA序列未知的miRNA，更便捷的方法是體外合成pre-miRNA，并構(gòu)建到帶有mir-30側(cè)翼雙臂序列的慢病毒載體中。當(dāng)miRNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)入細(xì)胞后，可產(chǎn)生莖環(huán)結(jié)構(gòu)的pri-miRNA或pre-miRNA，進(jìn)而在細(xì)胞內(nèi)源的miRNA加工機(jī)制下被剪切成成熟的miRNA。
二、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

    1、 用途廣泛，既可被包裝產(chǎn)生miRNA慢病毒，又可以質(zhì)粒形式直接轉(zhuǎn)染細(xì)胞而發(fā)揮調(diào)控作用。
    2、 pri-miRNA法保留了miRNA的天然雙臂結(jié)構(gòu)，更接近體內(nèi)真實(shí)情況，效果最好。
    3、 pre-miRNA法可直接合成pre-miRNA，免去了基因調(diào)取的流程，易于通量化。

三、服務(wù)內(nèi)容

    1、 合成pre-miRNA或調(diào)取pri-miRNA
    2、 目的序列與miRNA慢病毒載體的連接；
    3、 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
    4、 測(cè)序驗(yàn)證；

四、服務(wù)須知


服務(wù)項(xiàng)目客戶提供交付產(chǎn)物實(shí)驗(yàn)周期miRNA過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建（pre-miRNA法）1、pre-miRNA序列
2、指定載體1、miRNA過表達(dá)慢病毒載體
2、載體圖譜、測(cè)序結(jié)果2-3周miRNA過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建（pri-miRNA法）1、攜帶pri-miRNA序列的質(zhì)粒模板或pri-miRNA序列
2、指定載體1、miRNA過表達(dá)慢病毒載體
2、載體圖譜、測(cè)序結(jié)果3-4周
五、實(shí)驗(yàn)具體周期及費(fèi)用：請(qǐng)咨詢我司客服人員