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[供應]SILAC應用之蛋白質(zhì)互作實驗服務
- 產(chǎn)品產(chǎn)地：廣州
- 產(chǎn)品品牌：輝駿生物
- 包裝規(guī)格：B003
- 產(chǎn)品數(shù)量：999
- 計量單位：個
- 產(chǎn)品單價：1
- 更新日期：2025-01-23 17:29:40
- 有效期至：2026-01-23
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SILAC應用之蛋白質(zhì)互作實驗服務
詳細信息
一、SILAC研究蛋白質(zhì)相互作用概述
SILAC (Stableisotopelabelingwithaminoacidsincellculture， SILAC)結(jié)合免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)，來尋找互作蛋白，是SILAC在定量蛋白質(zhì)組學研究基礎(chǔ)上的進一步應用。基本思路是通過質(zhì)譜鑒定及分析蛋白的相對表達量來判斷某一蛋白是否與誘餌蛋白特異結(jié)合，當實驗組與對照組中某個蛋白質(zhì)含量達到統(tǒng)計學差異時，即可判定該蛋白質(zhì)與誘餌蛋白質(zhì)存在互作。
二、與傳統(tǒng)的免疫共沉淀(CoIP)或Pulldown相比，SILAC-IP有以下優(yōu)勢
1、特異性強，假陽性極低；
2、高通量，液相與質(zhì)譜連用，能最大限度的尋找到相互作用的蛋白質(zhì)；
3、靈敏度高
4、能直接檢測出與bait蛋白互作的其它蛋白的相對含量。
三、SILAC研究蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)流程
實驗流程：
不同的實驗背景和目的需對應用不同的SILAC-IP實驗方案
方案一：以正常細胞株為實驗材料
1.分別用輕、重鏈氨基酸培養(yǎng)細胞，培養(yǎng)至第5~6代時取等量細胞提取蛋白質(zhì)；
2.提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白分別用NormalIgG和抗bait蛋白的特異抗體做免疫沉淀（IP）；
3.混合輕、重鏈IP產(chǎn)物，SDS-PAGE分離；
4.膠內(nèi)酶切，肽段抽提、純化、鑒定和定量（圖1：成對出現(xiàn)的峰為非特異性結(jié)合蛋白）。
圖1正常細胞株的SILAC-IP實驗設計
方案二：以過表達bait蛋白的細胞株為實驗材料
1.分別用輕、重鏈氨基酸培養(yǎng)正常對照細胞和過表達bait蛋白的細胞株(帶標簽)，培養(yǎng)至第5~6代時取等量細胞混合并提取蛋白質(zhì)；
2.提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白均用標簽蛋白抗體做IP；
3.混合輕、重鏈IP產(chǎn)物，SDS-PAGE分離；
4.膠內(nèi)酶切，肽段抽提、純化，質(zhì)譜鑒定和定量（圖2：成對出現(xiàn)的峰強一致的峰為非特異性結(jié)合蛋白）。
圖2過表達細胞株的SILAC-IP實驗設計
方案三：以RNAibait基因的細胞株為實驗材料
1.分別用輕鏈、重鏈氨基酸培養(yǎng)RNAibait基因的細胞株和正常對照細胞株，培養(yǎng)至第5~6代時取等量細胞混合并提取蛋白質(zhì)；
2.提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白均用抗bait蛋白的特異抗體做IP；
3.混合輕、重鏈IP產(chǎn)物，SDS-PAGE分離；
4.膠內(nèi)酶切，肽段抽提、純化，質(zhì)譜鑒定和定量（圖3：成對出現(xiàn)且峰強一致的為非特異性結(jié)合蛋白；由于RNAi組的細胞株內(nèi)bait蛋白含量下降，因而與其相互作用的蛋白的豐度也相對較低，表現(xiàn)為峰強的減弱）。
圖3RNAi細胞株的SILAC-IP實驗設計
四、SILAC研究蛋白質(zhì)相互作用結(jié)果組成
圖4：SILAC分析蛋白質(zhì)相互作用的質(zhì)譜峰圖及被鑒定蛋白的生物信息分析
五、SILAC研究蛋白質(zhì)相互作用技術(shù)服務內(nèi)容
1、細胞同位素標記；(本公司出售L、M、H型Lys和Arg)
2、樣本制備與定量；
3、SDS-PAGE分離、酶切、LC-MS/MS分析；
4、蛋白定性及定量分析；
5、互作蛋白的生物信息學分析
6、實驗報告整理。
六、SILAC適用
SILAC能標記活的可傳代細胞、細菌等材料，不能標記組織、體液等樣本，詳情請咨詢我司。
七、實驗服務報告內(nèi)容
1、蛋白質(zhì)鑒定；
2、SILAC鑒定相互作用蛋白質(zhì)的分析結(jié)果；
3、顧客指定蛋白質(zhì)對應的質(zhì)譜峰圖；
4、完整的技術(shù)服務報告，包括實驗步驟、使用試劑、儀器、軟件檢索參數(shù)等。
八、實驗服務周期及收費標準：咨詢本公司
九、質(zhì)量承諾
1、根據(jù)您的實驗目的為您設計科學合理的SILAC實驗方案；
2、提供客觀、真實的實驗結(jié)果。
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